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细胞培养中流行的错误(过时)知识

血清一定需要加热灭活

人们通常通过在56°C加热30分钟的办法,来灭活血清中的补体,以及其中可能的微生物(比如支原体)的污染。加热灭活带来的问题是,血清中的氨基酸、维生素和生长因子等也会不同程度的被破坏。

Triglia and Linscott 的研究发现(1),胎牛血清中的补体含量很低,即使在未稀释的胎牛血清中,也观察不到溶血现象。另外37°C的加热能够有效灭活补体。所以对胎牛血清而言,并不需要通过专门的热灭活来灭活其中的补体。

早期的血清制备中的滤膜的孔径大于0.22um,不能有效的去除支原体的污染。热灭活可以去除支原体的污染。但是现在血清制备中的终端滤膜的孔径为0.1um甚至小到0.04um,所以血清中一般没有支原体的污染。

综合上面的观点,除非有特别的情况,标准厂家生产的胎牛血清一般不需要加热灭活。

需要说明的是,有些厂家生产的胎牛血清质量并不符合标准。笔者曾购买过国内一厂家的胎牛血清,没有灭活时细胞生长状态明显变差。所以如果您的胎牛血清来自一家可信度不高的厂家,那么为了安全起见,还是以加热灭活为好。

培养液中一定要加抗生素

随着超净台技术的提高,和超净台在细胞培养中的广泛使用,在细胞培养过程中如果操作规范,引进污染的机会并不大。同时抗生素的使用大大增加了支原体等微生物污染的机会,所以普通的细胞培养,最好不要加抗生素。

细胞培养室要异常的洁净

由于以前超净台技术比较差,在超净台开启的时候,外面的灰尘可能飘到超净台里,笔者曾经见过的一个老式的没有空气过滤装置超净台,仅使用紫外线灯灭菌,这样实验室的清洁就显得很重要。现代的超净台从原理上来说,超净台外的污染源是很难到达超净台里面的。所以保持细胞培养室一定程度的清洁固然有助于减少污染的机会,但是过度的清洁,比如用0.2%新洁尔灭拖地板,或者在培养室内加紫外线灯消毒,并不需要,更重要的是实验操作的规范。笔者曾经工作过的一个细胞培养室,维护实验室清洁的工作就是每天拖一次地板,每天大家进出并不换鞋换衣服,在2年多的时间内从没有发生过任何污染。

在超净台上使用酒精灯

事实上使用酒精灯会造成空气对流,从而带起超净台面上的灰尘,反而增加污染的机会。更何况还增加了火灾的隐患。

1) Triglia, R.P., Linscott, W.D. 1980. Titers of nine complement components, conglutinin and C3b inactivator in adult and fetal bovine sera. Molecular Immunology. 17:741-748.